VERO C1008傳代形式細(xì)胞株哪提供 "

公司提供部分ATCC細(xì)胞有(限于頁(yè)面篇幅，公司全部細(xì)胞并未展示，如有具體所需細(xì)胞，請(qǐng)咨詢我們哦┈技┈術(shù)(訂購(gòu))┈熱┈線：0┈2┈1┈5┈4┈3┈8┈5┈3┈1┈3(1┈5┈8┈0┈0┈5┈7┈6┈8┈6┈7┈微┈信┈同┈號(hào))┈聯(lián)┈系┈Q┈Q：3┈3┈0┈6┈0┈8┈4┈3┈5┈0)；CRL-1459|CCD-18Co細(xì)胞；CRL-2797|MOVAS細(xì)胞；CRL-1831|FHC細(xì)胞；CRL-2638|CT26.WT [CT26WT]細(xì)胞；HB-8064|Hep 3B2.1-7細(xì)胞；CCL-2.1|Hela 229細(xì)胞；HB-8065|Hep G2細(xì)胞；CCL-131|Neuro-2a/N2a細(xì)胞；CRL-2780|ATRFLOX[Mutatect]細(xì)胞；CL-188|LS174T細(xì)胞；CRL-2547|Panc 10.05細(xì)胞；HB-8065|HepG-2細(xì)胞；CCL-13|HeLa[Chang Liver]細(xì)胞；CRL-2233|SNU-398細(xì)胞；CCL-75.1|WI－38AV13細(xì)胞；CRL-5892|NCI-H1755[H1755]細(xì)胞；CRL5844|NCI-H838[H838]細(xì)胞；CRL-5875|NCI-H1563[H1563]細(xì)胞；CRL-5928|NCI-H2170[H2170]細(xì)胞；CRL-2177|SW 1271[SW-1271; SW1271]細(xì)胞；CRL-5889|NCI-H1703[H1703]細(xì)胞；CRL-5826|NCI-H226[H226]細(xì)胞；CRL-5900|NCI-H1869[H1869]細(xì)胞；HTB-59|SW 900[SW-900; SW900]細(xì)胞；CRL-1573|HEK-293細(xì)胞；CRL-1441|G401細(xì)胞；CRL-1500|ZR75-1細(xì)胞；CRL-1504|ZR75-30細(xì)胞；HTB-126|Hs-578T細(xì)胞；CRL-1897|UACC812細(xì)胞；HTB-111|AN3 CA細(xì)胞；CCL-2.1|HeLa229細(xì)胞；CRL-7924|HeLa-S3細(xì)胞；HTB-81|DU-145細(xì)胞；CRL-11610|RWPE2細(xì)胞；CRL-7002|Hs 1.Tes細(xì)胞；CRL-7131|Hs 181.Tes細(xì)胞；CRL-1740|LNCaP clone FGC細(xì)胞；" "

細(xì)胞培養(yǎng)集錦(一個(gè)培養(yǎng)300多種細(xì)胞人的經(jīng)驗(yàn)總結(jié))
一、消化與吹打
很多朋友討論細(xì)胞培養(yǎng)問(wèn)題，見(jiàn)到很多很好的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，這里說(shuō)一些我個(gè)人的經(jīng)驗(yàn)，因?yàn)橐恍┍容^特殊的原因，我自己培養(yǎng)接觸過(guò)近300種細(xì)胞，常用于做實(shí)驗(yàn)的，累積有百余種，可以說(shuō)遇到過(guò)許多各式各樣古怪的細(xì)胞。這里挑細(xì)胞消化開始做我的篇專題，并不是因?yàn)榧?xì)胞消化重要，而是近期看到大家頻繁討論這個(gè)話題，我就拋磚引玉，下面幾點(diǎn)拙見(jiàn)，可能與其它朋友總結(jié)的一些經(jīng)驗(yàn)有點(diǎn)出入，僅供大家參考。
許多同學(xué)對(duì)細(xì)胞消化做了許多研究，得出了很多有價(jià)值的經(jīng)驗(yàn)，也見(jiàn)到很多人的困惑。其實(shí)細(xì)胞培養(yǎng)，尤其是細(xì)胞系的培養(yǎng)，就消化而言，不是太難，做得多了，善于總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，就能把細(xì)胞越養(yǎng)越好。一般的程序步驟，細(xì)節(jié)操作，我這里就不講了，只講一些基本操作背后的知識(shí)，如果不對(duì)之處，歡迎指正，一起討論：
1)其實(shí)絕大部分細(xì)胞消化的時(shí)候是只要用胰酶潤(rùn)洗一遍即可，吸去胰酶后，殘留的那些無(wú)法計(jì)算體積的附著在細(xì)胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足夠消化細(xì)胞（絕大部分1min不到）。對(duì)于這些細(xì)胞原則上不要用胰酶孵育細(xì)胞，連續(xù)這樣傳代，對(duì)細(xì)胞傷害很大。簡(jiǎn)單的程序是PBS潤(rùn)洗吸去，胰酶潤(rùn)洗吸去，然后37度消化。
2)什么算是消化好了呢？不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才算消化好了，一般你肉眼觀察貼壁細(xì)胞層，只要能移動(dòng)了，多半呈沙壯移動(dòng)，其實(shí)已經(jīng)可以了，很多人喜歡把細(xì)胞消化或者吹打成完全分離細(xì)胞，這是沒(méi)有必要的。一般能移動(dòng)了，說(shuō)明細(xì)胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了，細(xì)胞之間的附著也已經(jīng)消失了，細(xì)胞已經(jīng)立分布了（雖然沒(méi)有呈現(xiàn)很廣的離散分布）。這個(gè)時(shí)候應(yīng)該停止消化，不要等到看到鏡下所有細(xì)胞都分離得非常好，間隙很大，才停止。細(xì)胞就是完全成單個(gè)細(xì)胞懸液，之后在貼壁的過(guò)程中仍然會(huì)聚集，這個(gè)是貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，尤其是腫瘤細(xì)胞的一個(gè)特性，無(wú)論死活的細(xì)胞都是如此，你可以嘗試，準(zhǔn)備的單個(gè)細(xì)胞懸液，貼壁后觀察細(xì)胞，仍然是幾個(gè)幾個(gè)細(xì)胞聚集在一起。一些懸浮培養(yǎng)細(xì)胞也是如此，容易聚集，不要去嘗試過(guò)幾個(gè)小時(shí)就拿出來(lái)吹打成單細(xì)胞懸液（不要笑，這個(gè)是初養(yǎng)懸浮細(xì)胞的人常犯的錯(cuò)誤，以為懸浮培養(yǎng)就是一個(gè)一個(gè)分開）。細(xì)胞只要能從基質(zhì)上脫離下來(lái)，這個(gè)時(shí)候即使是成片的（比如Calu-3細(xì)胞），吹打不超過(guò)20次后（一般10次即可），成小規(guī)模聚集（10個(gè)細(xì)胞左右），是正常的，不要試圖再去延長(zhǎng)消化時(shí)間，或者像有的同學(xué)那樣吹打1h，等待單細(xì)胞懸液出現(xiàn)。
3)我常看到一個(gè)比較復(fù)雜的四步消化法，這個(gè)挺有意思，我也是次聽(tīng)說(shuō)，應(yīng)該是網(wǎng)友自己發(fā)展出來(lái)的方法，很有參考價(jià)值。但我估計(jì)這個(gè)方法可能對(duì)付少數(shù)非常怪異的細(xì)胞才需要這么復(fù)雜的程序。我目前養(yǎng)過(guò)的近300株細(xì)胞里面，還沒(méi)遇到這么怪異的。比如Caco2其實(shí)是很好消化的細(xì)胞，不需要胰酶孵育即可，只是有點(diǎn)成片分布。不要以為成片分布是自己沒(méi)養(yǎng)好，這個(gè)視細(xì)胞而定。如果和標(biāo)準(zhǔn)形態(tài)不一致，那可能是自己沒(méi)消化好導(dǎo)致的，但如果消化方法正確，仍然成片分布，甚至完全吹打成單細(xì)胞懸液，貼壁后仍然成片分布，這是細(xì)胞的特性，是因?yàn)橘N壁過(guò)程中重新聚集了。這個(gè)時(shí)候你拼了命要去讓它均勻分布，你的細(xì)胞之后會(huì)對(duì)你越來(lái)越不好。
4)比較難消化的細(xì)胞（潤(rùn)洗方法5min還不能消化），就以colon cancer為例，比如HCT15, LS411和KM12，這樣的細(xì)胞一般需要用少量胰酶孵育，但也不需要很多，一般100 mm dish，一次多加入500ul，就足夠了，一般我加300ul。即使這樣難消化的細(xì)胞，一般不超過(guò)5min，即可見(jiàn)細(xì)胞成片移動(dòng)，就應(yīng)該停止消化。一些正常細(xì)胞也會(huì)有難消化的時(shí)候，比如tsDC細(xì)胞，但也只要用少量胰酶孵育，3min左右即可看到成片沙狀移動(dòng)。
5)常規(guī)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)（增殖，凋亡，遷移，分化之類的），受消化影響不是很大，如果不用胰酶去孵育而使用潤(rùn)洗的方法消化的話（難消化細(xì)胞例外）。但少數(shù)實(shí)驗(yàn)，比如病毒包裝，對(duì)細(xì)胞代數(shù)，對(duì)細(xì)胞狀態(tài)要求。這個(gè)時(shí)候，胰酶消化，就是潤(rùn)洗，都會(huì)對(duì)細(xì)胞包裝病毒的能力有影響，傳代次數(shù)一多，細(xì)胞包裝能力就會(huì)逐漸下降（當(dāng)然也有其它因素影響包裝效率）。這個(gè)時(shí)候都不用胰酶消化，用一些鹽溶液（不是EDTA液）即可。這些鹽溶液通過(guò)影響ECM相關(guān)酶的活性，來(lái)使得細(xì)胞脫離基質(zhì)附著表面，但不切割任何蛋白。
6)EDTA的作用。許多人不用胰酶，只用EDTA，或者用trypsin/EDTA聯(lián)合作用。這里要明白，trypsin切割ECM的一些負(fù)責(zé)粘連和附著的蛋白，而EDTA通過(guò)螯合Ca離子，作用于Integrin的活性，所以EDTA的作用更加溫和。有的人在trypsin里添加一些EDTA，或者對(duì)付特別難消化的細(xì)胞，添加多一些EDTA，就是這個(gè)道理。一般不要試圖延長(zhǎng)消化時(shí)間（如果10min還消化不的話），而應(yīng)該想其它辦法。
7)PBS洗滌。消化之前用PBS洗滌，是常見(jiàn)的操作，因?yàn)镾erum含有抑制trypsin的蛋白。但這里面也有學(xué)問(wèn)可以講，對(duì)于一些難消化細(xì)胞，那么可以配制不含Ca，Mg離子的PBS，因?yàn)檫@些離子也會(huì)抑制trypsin的活性。但對(duì)于絕大部分胰酶或者EDTA溶液潤(rùn)洗即可消化的細(xì)胞，不需要配制如此溶液。
總結(jié)下來(lái)，雖然以上說(shuō)的是關(guān)于消化的，但其實(shí)消化并不是細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵所在（雖然很重要），關(guān)鍵所在是細(xì)胞來(lái)源，血清質(zhì)量和水源（自己配制溶液的話）。我看到版上許多人養(yǎng)細(xì)胞遇到各種各樣的問(wèn)題，很多時(shí)候bottleneck沒(méi)有找到，雖然通過(guò)其它方法有所改善，但仍然是事倍功半。因?yàn)槿藗兺⒁庾约旱牟僮鳎傆X(jué)得自己沒(méi)有經(jīng)驗(yàn)，而忽視試劑，溶液尤其是細(xì)胞的質(zhì)量，后者其實(shí)才是許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)的問(wèn)題。" "

無(wú)菌操作的演示：
凡是帶入超凈工作臺(tái)內(nèi)的酒精、PBS、培養(yǎng)基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面
靠近酒精燈火焰操作。
器皿使用前過(guò)火滅菌
繼續(xù)使用的器皿（如瓶蓋、滴管）要放在高處，使用時(shí)仍要過(guò)火。 各種操作要靠近酒精燈，動(dòng)作要輕、準(zhǔn)確，不能亂碰。如吸管不能碰到廢液缸。
吸取兩種以上的使用液時(shí)要注意更換吸管，防止交叉污染。
器械的清洗和消毒
玻璃器械洗消：
一、新的玻璃器皿的洗消：
自來(lái)水刷洗，除去灰塵。
烘干、泡鹽酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀鹽酸中12小時(shí)以除去臟物、鉛、砷等物。
刷洗、烘干：12小時(shí)后立即用自來(lái)水沖洗，再用洗滌劑刷洗，自來(lái)水沖干凈后用烤箱烘干。
泡酸、清洗：用清潔液（重鉻酸鉀120g：濃硫酸200ml：蒸餾水1000ml）浸泡12小時(shí)，然后從酸缸內(nèi)撈出器皿用自來(lái)水沖洗15次，后蒸餾水沖洗3-5次和用雙蒸水過(guò)3次。
烘干、包裝：洗干凈后先烘干，然后用牛皮紙（油光紙）包裝。 高壓消毒：包裝好的器皿裝入高壓鍋內(nèi)蓋好蓋子，打開開關(guān)和安全閥，當(dāng)蒸氣成直線上升時(shí)，關(guān)閉安全閥，當(dāng)指針指向15磅時(shí)，維持20-30分鐘。
高壓消毒后烘干
二、舊的玻璃器皿的洗消：
刷洗、烘干：使用過(guò)的玻璃器皿可直接泡入來(lái)蘇爾液或洗滌劑溶液中，泡過(guò)來(lái)蘇爾溶液（洗滌劑）的器皿要用清水刷洗干凈，然后烘干。
泡酸、清洗：烘干后泡入清潔液（酸液），12小時(shí)后從酸缸內(nèi)撈出器皿立即用自來(lái)水沖洗（避免蛋白質(zhì)干涸后粘附于玻璃上難以清洗），再用蒸餾水沖洗3次。
烘干、包裝：洗干凈的器皿烘干后取出用牛皮紙（油光紙）等包裝。" "

從基礎(chǔ)的地方教起，一步一步詳細(xì)介紹細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，非常好的開門教程
常用設(shè)備
準(zhǔn)備室的設(shè)備：?jiǎn)握麴s水蒸餾器、雙蒸餾水蒸餾器、酸缸、烤箱、
高壓鍋、儲(chǔ)品柜（放置未消毒物品）、儲(chǔ)品柜（放置消毒過(guò)的物品）、包裝臺(tái)。
配液室的設(shè)備：扭力天平和電子天平（稱量藥品）、PH計(jì)（測(cè)量培養(yǎng)用液PH值）、磁力攪拌器（配置溶液室攪拌溶液）。
培養(yǎng)室的設(shè)備：液氮罐、儲(chǔ)品柜（存放雜物）、日光燈和紫外燈、空氣凈化器系統(tǒng)、低溫冰箱（-80℃）、空調(diào)、二氧化碳缸瓶、邊臺(tái)（書寫實(shí)驗(yàn)記錄）。
放在無(wú)菌間的設(shè)備：離心機(jī)（收集細(xì)胞）、超凈工作臺(tái)、倒置顯微鏡、CO2孵箱（孵育培養(yǎng)物）、水浴鍋、三氧消毒殺菌機(jī)、4℃冰箱（放置serum和培養(yǎng)用液）。
無(wú)菌操作
無(wú)菌室的滅菌：
定期打掃無(wú)菌室：每周打掃一次，先用自來(lái)水拖地、擦桌子、超凈工作臺(tái)等，然后用3‰來(lái)蘇爾或者新潔爾滅擦拭。
CO2孵箱（培養(yǎng)箱）滅菌：先用3‰新潔爾滅擦拭，然后用75％酒精擦拭，再用紫外燈照射
實(shí)驗(yàn)前滅菌：打開紫外燈、三氧殺菌機(jī)、空氣凈化器系統(tǒng)各20-30分鐘
實(shí)驗(yàn)后滅菌：用75％酒精（3‰新潔爾滅）擦拭超凈臺(tái)、邊臺(tái)、倒置顯微鏡的載物臺(tái)。
實(shí)驗(yàn)人員的無(wú)菌準(zhǔn)備：
肥皂洗手。
穿好隔離衣、帶好隔離帽、口罩、放好拖鞋
用75％酒精棉球擦凈雙手。" "

公司已合作單位有山西中醫(yī)學(xué)院、福建醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院、上海市第六人民醫(yī)院、北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部、四平中心醫(yī)院、廣州中醫(yī)藥大學(xué)、中科院上海生命科學(xué)研究院生化與細(xì)胞研究所、解放軍第306醫(yī)院、江南大學(xué)、西南醫(yī)院、吉首大學(xué)、西南大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院、寧波大學(xué)、福建醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院、中南大學(xué)、延安大學(xué)附屬醫(yī)院、中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所、天津市兒童醫(yī)院、江蘇省中醫(yī)藥研究院、湘雅醫(yī)學(xué)院、第四軍醫(yī)大學(xué)預(yù)防系勞動(dòng)與環(huán)境教研室、揚(yáng)州大學(xué)、上海交通大學(xué)、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)、浙江省立同德醫(yī)院、中國(guó)人民解放軍第150中心醫(yī)院、蘇州大學(xué)、四川大學(xué)華西醫(yī)院、云南大學(xué)、揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院、海南醫(yī)學(xué)院、江蘇腫瘤醫(yī)院、上海市閔行區(qū)中心醫(yī)院、大連醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院、中國(guó)科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院、沈陽(yáng)藥科大學(xué)、廣州市第八人民醫(yī)院、南京大學(xué)、浙江中醫(yī)藥大學(xué)、蘭州大學(xué)、上海中醫(yī)藥大學(xué)、中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所、廈門市婦幼保健院、重慶大學(xué)、南京軍區(qū)總醫(yī)院、天津市人民醫(yī)院、北京醫(yī)學(xué)科學(xué)腫瘤醫(yī)院、江蘇大學(xué)、桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院、中國(guó)科學(xué)院化學(xué)研究所、、鄭州大學(xué)附屬醫(yī)院、湖北省人民醫(yī)院、四川大學(xué)華西第二醫(yī)院、廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院、黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院、青海紅十字醫(yī)院、廣州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院、北京紅十字朝陽(yáng)醫(yī)院、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬一院、江西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院、北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院、山西醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院、上海長(zhǎng)海醫(yī)院、北京阜外醫(yī)院、北京安貞醫(yī)院、上海遠(yuǎn)大心胸醫(yī)院、哈爾濱醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院、廣東霍英東心臟中心、中山醫(yī)科大學(xué)中山眼科中心、天津眼科醫(yī)院、溫州醫(yī)學(xué)院附屬眼視光醫(yī)院、北京兒童醫(yī)院、重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院、復(fù)旦大學(xué)附屬兒童醫(yī)院、南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院、湖北十堰市太和醫(yī)院、濟(jì)南市兒童醫(yī)院、中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院、天津醫(yī)科大學(xué)代謝病醫(yī)院" "

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C4433 RL95-2復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C1113 RL1復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C1878 RL復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C1877 RKO-ppp2Ca復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C4122 RKO-E6復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C4121 RKO-AS45-1復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C4120 RKO復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C1874 RKN復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C5062 RK-13復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C1110 RK1復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C5091 RIN-m5F復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C5059 RIN-m復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C3020 RH-35復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C1107 RH35復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C1106 RH-30復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C1105 RGM-1復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C1104 RGC-5復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C1873 RF952復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C5053 RF/6A復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C7037 RERF-LC-Sq1復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C1871 RERF-LC-MS復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C7043 RERF-LC-KJ復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C7036 RERF-LC-AI復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C7042 RERF-LC-Ad1復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C5060 RenCa復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C1101 Reh復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C1869 RD-ES復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C4721 RD復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C1868 RCM-1復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C1099 RCFBF復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C1098 RCC-krause復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C1867 RCC10RGB復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C1097 RCBBF復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C1096 RC-4B/C復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C1095 RBSMC復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C1094 RBMVEC復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C5004 RBL-2H3復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C5082 RBL-1復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C1091 RBE復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C1090 Rb復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C1089 RAW264.7復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C5003 RAW 264.7復(fù)蘇形式細(xì)胞株
C1088 RASMC復(fù)蘇形式細(xì)胞株"